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Proteomica e Metabolomica
La proteomica consiste nell'identificazione sistematica delle proteine espresse da una cellula, un organismo o in risposta ad un determinato stimolo.
Tale termine è stato coniato da Wilkins ed il suo significato deriva da “PROTEins expressed by genOME”.
Analogamente, la metabolomica studia l’impronta chimica lasciata da specifici processi cellulari (profilo metabolico relativo a piccole molecole).
Non esiste una sola proteomica o metabolomica, bensì differenti approcci sperimentali, ciascuno con peculiarità, vantaggi e svantaggi, spesso fra di loro complementari.
PRONUTRIGEN ha sviluppato protocolli di estrazione per matrici vegetali, animali e microbiche ed implementato le seguenti tecniche sperimentali:
- Proteomica
analisi del profilo proteico (proteomica descrittiva e proteomica differenziale) con approccio bottom-up (digestione triptica), eventuale frazionamento su gel SDS-PAGE, ed analisi in cromatografia liquida su scala nano accoppiata a spettrometria di massa QTOF; - Peptidomica
analisi del profilo peptidico utilizzando filtri a differente cut-off molecolare ed analisi in cromatografia liquida su scala nano accoppiata a spettrometria di massa QTOF; - Metabolomica LCQTOF
analisi del profilo metabolico in cromatografia liquida UHPLC accoppiata a spettrometria di massa QTOF, per la caratterizzazione esaustiva del metabolismo secondario e parziale del metabolismo primario; - Metabolomica GCMS
analisi del profilo metabolico in gas cromatografia accoppiata a spettrometria di massa a quadrupolo, dopo derivatizzazione, per la caratterizzazione esaustiva del metabolismo primario; - Screening LCQTOF
screening di metaboliti secondari o composti chimici di natura organica attraverso approcci in spettrometria di massa ad alta risoluzione eventualmente accoppiati a elucidazione strutturale sulla base dello spettro di massa tandem (MS/MS + molecular structure correlation); - Post-acquisition processing
sistemi in silico per l’inferenza proteica, l’identificazione di metaboliti, l’elucidazione strutturale sulla base dello spettro MS/MS, e processamento per metabolomica differenziale (allineamento di massa e tempo di ritenzione, filtri per frequenza e per variabilità, sistemi di normalizzazione e baselining) – Ove richiesto, sono disponibili anche approcci chemometrici e statistici per la definizione di proteine/metaboliti differenziali o per biomarker discovery (Volcano plot, hierarchical clustering, PCA, PLS-DA, Bayesian biomarker discovery).
Per l’attività di ricerca in ambito proteomico e metabolomico PRONUTRIGEN dispone di librerie e databases commerciali (Metlin, NIST, Fiehn) e custom.